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簡要描述:人白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒適用于體外定量檢測人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中天然和重組CD40L/TNFSF5濃度。本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
產(chǎn)品型號(hào):
所屬分類:Human/人檢測試劑盒
更新時(shí)間:2015-11-03
人白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CD40L/TNFSF5抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人CD40L/TNFSF5與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人CD40L/TNFSF5抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。抗人CD40L/TNFSF5抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CD40L/TNFSF5結(jié)合、*與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,人CD40L/TNFSF5濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人CD40L/TNFSF5的濃度。
人白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超
過50℃,使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,
靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為4000pg/mL)。
然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃
度:4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/mL,標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空
白孔0pg/mL。如配制2000pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL4000pg/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)
準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
4. *化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配
制100-200μL。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當(dāng)日使用。
5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制
100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當(dāng)日使用。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據(jù)實(shí)際用量來稀釋,如200μL/管)
人白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作概要
1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各 100μL, 37℃孵育 90 分鐘
2. 倒去孔內(nèi)液體,加入 100μL *化抗體工作液,37℃孵育 60 分鐘
3. 洗滌 3 次
4. 加入 100μL 酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育 30 分鐘
5. 洗滌 5 次
6. 加入 90μL 底物溶液, 37℃孵育 15 分鐘左右
7. 加入 50μL 終止液,立即在 450nm 波長處測量 OD 值
8. 結(jié)果計(jì)算
人白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒特別說明:
*: [96T/48T](打開包裝后請及時(shí)檢查所有物品是否齊全完整)
#: 一周內(nèi)使用可存于4℃,需長時(shí)間存放或多次使用建議存于-20℃.
相關(guān)試劑在分裝時(shí)會(huì)比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些,請?jiān)谑褂脮r(shí)量取而非直接倒出!
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