探針法熒光定量PCR試劑盒是使用探針法進(jìn)行qPCR實驗的 即用型優(yōu)化預(yù)混液。兼容所有的qPCR檢測儀器,多種模板。探針法熒光定量PCR試劑盒使用時僅需加入模板、探針和引物即可進(jìn)行實驗。反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度也是探針法檢測PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。
探針法熒光定量PCR試劑盒qPCR探針法的幾種方式:
1、Taq-Man探針:Taq-Man探針法是經(jīng)典的探針方法。
2、雙雜交探針:與Taq-Man法不同,雙雜交探針的供體基團(tuán)和受體基團(tuán)分別在兩條探針上,這兩條探針都可以與擴(kuò)增產(chǎn)物雜交,雜交位置不同但很接近,反應(yīng)時兩條探針一頭一尾雜交于擴(kuò)增產(chǎn)物上,雜交后兩個基團(tuán)距離在10nm以內(nèi),此時產(chǎn)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象,激發(fā)光下供體基團(tuán)不發(fā)光,受體基團(tuán)發(fā)光,檢測受體基團(tuán)的發(fā)光情況既可以確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的情況。
3、分子信標(biāo)探針:分子信標(biāo)探針采用的是在反應(yīng)中增加熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)距離的方法,和Taq-Man法不同,分子信標(biāo)探針不是采用酶切的方式使熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,而是通過雜交的方式改變探針二級結(jié)構(gòu),增加兩個基團(tuán)的距離從而使熒光基團(tuán)發(fā)光。
4、蝎形探針:蝎形探針又叫蝎形引物,因形狀類似蝎子而得名,其基本原理與分子信標(biāo)探針十分類似,不同點在于,蝎形探針3’端帶了PCR引物,反應(yīng)中得到的產(chǎn)物與蝎形探針為一個分子,探針的雜交在分子內(nèi)部,而不需要兩個分子參與,從而使雜交反應(yīng)更加迅速,高效。