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抗體課堂:正確選擇同型對照,陽性對照
同型對照的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的,而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。同型對照要與一抗的來源、Ig分型和標(biāo)記*一致。例如:一抗是FITC標(biāo)記,其抗體分型是小鼠的IgG1,則同型對照要選擇是FITC標(biāo)記的小鼠的IgG1。這里如同使用流式抗體一樣,同樣的不可離開說明書!
多抗的同型對照:
絕大部分的同型對照產(chǎn)品都是單克隆抗體,因此不適用于作為多克隆抗體的對照(因為多抗含有多種IgG的亞型)。
陽性對照的使用是一個實驗中確定抗體及檢測系統(tǒng)是否正常工作的依據(jù),也是確定待測標(biāo)本中是否存在待測蛋白的一個依據(jù)!尤其是檢測的標(biāo)本是不確定是否有待測蛋白表達時。因此當(dāng)實驗沒有陽性結(jié)果出現(xiàn)時,的選擇是實驗合適的陽性對照。
說明書上都有推薦的陽性對照。但是如果說明書上沒有推薦時,請參考以下條款:
看看說明書中是否有Abreviews。任何被其他客戶成功檢測的組織、細(xì)胞或者裂解物均可以作為合適的陽性對照!
根據(jù)說明書上的Swiss-Prot或Omnigene數(shù)據(jù)庫來查找。這些數(shù)據(jù)庫經(jīng)常會列出該蛋白表達的組織,這也可以作為合適的陽性對照!
查查該蛋白的GeneCards吧,這里通常會有蛋白在不同組織的表達水平。
對于不同的問題,不同的測試,相關(guān)性的不同的性能,拿流式抗體來說,在使用的過程中要特別謹(jǐn)說明書使用!
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