酶聯(lián)免疫吸附實驗是一種用來定量檢測樣本中某種抗原的方法??乖且环N會導(dǎo)致動物免疫系統(tǒng)發(fā)起防御反應(yīng)的毒素或其他外來物質(zhì),例如流感病毒或環(huán)境污染物。潛在抗原的范圍很廣,因此在許多研究和檢測領(lǐng)域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原。使用 ELISA 分析細胞裂解物、血樣、食品等特定物質(zhì)。ELISA 有四種主要類型:直接法、間接法、競爭法和雙抗夾心法。
檢測試劑盒采用雙抗體夾心法檢測S蛋白,試劑盒中含有包被過的聚苯乙烯酶標板,酶標板的微孔中包被有抗S蛋白的抗體。將稀釋后的標準品或待檢樣本加入微孔中孵育,如果存在S蛋白,將會被預(yù)包被的抗體捕獲,洗滌微孔以去除非特異結(jié)合的物質(zhì)。將辣根過氧化物酶標記的抗S蛋白的抗體加入微孔,這種被標記的抗體將會與微孔中的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合形成夾心復(fù)合物,洗滌去除多余未結(jié)合的標記抗體。向微孔中加入包含過氧化氫的底物緩沖液,以及3,3'5,5'四甲基聯(lián)苯胺(TMB),加入底物緩沖液后顯示藍色即表示有S蛋白存在,顯色強度與樣本中S蛋白濃度呈正比。用硫酸終止液終止反應(yīng)的進行,酶標儀在450 nm波長激發(fā)光下測量OD值,根據(jù)標準品濃度與OD 值繪制的標準曲線,可計算出待檢樣本中S蛋白的含量。
檢測試劑盒儲存要求:
試劑盒標準品于-35~-15℃及以下可穩(wěn)定12個月,建議于-85~-65℃儲存。標準品開啟使用后,2~8℃儲存應(yīng)在1天內(nèi)使用。若需多次使用,應(yīng)根據(jù)需要進行分裝,于-35~-15℃及以下凍存,可以儲存3個月,不可反復(fù)凍融;
試劑盒中其余組份于2~8℃儲存,防止冷凍,避免強光照射,有效期12個月。